HPLC의 기본개념 및 기초원리
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작성일 23-02-27 14:16
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그래서 미지의 물질을 확인하기 위해서는 기지의 물질이 가지는 tR`과 VR`값과 미지 물질의 tR과 VR의 실험값을 비교함으로써 정성분석이 가능하다.
분리인자(Separation factor, α)
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크기인자(Capacity factor, k)
어떤 實驗에서 크기인자가 일치하는 ingredient이 존재한다면 그 ingredient들은 분리가 안된다된다.
분리도(Resolution, Rs)
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주어진 實驗조건 즉 일정한 정지상과 이동상에서 일정한 유속, 온도 및 동일한 시료주입조건일 때 N값은 거의 일정하다.
시료가 분리되려면 정지상에 적당히 머무르게 할 필요가 있는데 이 머무르게 하는 효능를 크기인자라 한다. 즉 ”컬럼은 수많은 정지상 입자의 단(층)으로 충전되어 있다“는 concept(개념)을 도입하고 이 理論적 단수를 N으로 표시하며 이 N을 컬럼효율의 척도로 사용한다.
컬럼효율과 理論단 해당높이(HETP)
분리도는 인접되는 ingredient들간의 분리된 정도를 정량적으로 나타낸 값이다. 이 단理論은 용질의 이동속도와 용리띠의 모양을 계산하는 식은 제공하지만 용질의 띠가 용리도중에 넓어지는 현상에 대한 충분한 설명(explanation)은 할 수 없다. 컬럼단이 理論대로라고 한다면 N값과 컬럼길이 L을 알면 가상적이긴 하지만 한 단의 높이를 계산할 수 있다. 이 값은 시료의 조정된 머무른 시간 tR`과 용매피크의 머무른 시간 tM의 비로 구할 수 있다.
설명
다.
H값은 컬럼의 효율이 커질수록 감소한다. 예를 들어 화합물 A와 B의 k값이 같아서 α=1이라면 두 ingredient은 전혀 분리되지 않는 것을 의미한다. 이 값은 일정한 정지상에 대하여 이동상의 선택으로 크게 변화시킬 수 있는 인자이다. 만일 tR이 일정하다면 N값이 증가함에 따라 피크폭 W는 좁아지게 되어 좋은 크로마토그램을 얻게된다된다. 왜냐하면 실험조건에 따라 같은 물질의 tR이나 VR값이 달라지기 때문이다. 즉 H값이 작아질수록 같은 컬럼길이에서 일어나는 평형의 수는 증가하게된다된다. 이러한 혼합물을 분리할 때 컬럼에서 용출되는 각 ingredient의 분리상태를 나타내는 인자를 분리인자(separation or selectivity factor)라 하고 α로 표시한다. 實驗적으로 N값은 피크의 폭(W)과 머무른 시간 tR을 구하여 다음 식에 의해 계산한다. 즉 이 α값은 시료중 각 ingredient의 크기인자(k)값의 비로서 나타낸다.
일반적으로 컬럼의 효율을 증가시키려면 N값을 크게하는데 컬럼길이를 증가시키거나 정지상 충전물의 입자를 작게 한다. 또한 혼합물중의 각 ingredient이 컬럼에서 분리된 상태로 용출되기 위해서는 서로 다른 k값을 가지고 이동해야한다. 실제입자의 지름은 이 높이와 다르지만 용리결과를 조정하는데 중요한 값이 된다된다.
HPLC의 기본개념 및 기초원리
크로마토그램에서 각 시료 constituent 의 피크에 해당되는 부피 또는 시간을 각각 머무른 부피(VR) 및 머무른 시간(tR)이라 하는데 이 값을 용매피크의 머무름(tM)에 대하여 보정한 tR-tM과 VR-VM을 각각 tR`과 VR`으로 표시하고 조정된 머무른 시간 혹은 부피라고 한다. 이 가상적인 한 단의 높이를 理論단 해당높이(Height equivalent to theoretical plate, HETP)라하고 H로 표시하는데 관계식은 다음과 같다. 그런데 시료물질의 머무른 시간이나 머무른 부피의 절대값은 실제로 얻기 어렵다.
HPLC,기초원리,크로마토그래피
크로마토그램에서 각 시료 성분의 피크에 해당되는 부피 또는 시간을 각각 머무른 부피(VR) 및 머무른 시간(tR)이라 하는데 이 값을 용매피크의 머무름(tM)에 대하여 보정한 tR-tM과 VR-VM을 각각 tR`과 VR`으로 표시하고 조정된 머무른 시간 혹은 부피라고 한다. 그래서 미지의 물질을 확인하기 위해서는 기지의 물질이 가지는 tR`과 VR`값과 미지 물질의 tR과 VR의 experiment(실험)값을 비교함으로써 정constituent 석이 가능하다. 그런데 시료물질의 머무른 시간이나 머무른 부피의 절대값은 실제로 얻기 어렵다.
순서
크로마토그래피의 컬럼효율은 Matrin과 Synge에 의해 “컬럼단 理論(plate theory)으로 설명(explanation)되었다. 왜냐하면 experiment(실험)조건에 따라 같은 물질의 tR이나 VR값이 달라지기 때문이다. 보통 Rs는 한 ingredient의 피크가 베이스라인까지 완전히 내려온 후 다른 ingredient의 피크가 나타난 경우에 다음 식으로 계산한다.
