실습보고서 - 단백질 정량법
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작성일 23-03-14 12:31
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이런 발색을 이용한 단백질의 정량은 시간이 지날수록 결과 값이 달라지는 경우가 생기기 때문에 되도록 빠른 시간 내에 시행해야 한다. 염료로는 Coomassie Blue G-250을 사용하며, 이 염료가 단백질과 결합해 생기는 파장의 변화를 측정한다.
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실습보고서 - 단백질 정량법
설명
단백질의 정량을 위해서는 표준물질이 필요한데, BSA나 BGG를 이용해 표준곡선을 얻을 수 있따
UV-Visible Spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정하여 표준 물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)나 BGG(Bovine Gamma Globulin)를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정하는 방법중 하나이다. 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다.
다.
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단백질측정,단백질 정량법
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UV-Visible Spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정하여 표준 물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)나 BGG(Bovine Gamma Globulin)를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정하는 방법중 하나이다. 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다.)를 만들어 염료를 넣은후 reaction response시켜 595㎚에서 흡광도를 측정(測定) 을 하고 그 결과 값을 이용해 표준곡선을 그린다. 어느 단백질이든 동일한 염료를 더해준 후 약 5분 정도 reaction response시키고, 595㎚에서 흡광도를 측정(測定) 하기만 하면 되는 간단한 방법이지만 대신 Coomassie dye가 염, detergent, 지방 등에 의해 쉬이 effect(영향) 을 받는다는 단점이 있따 특히나 Sample에 계면 활성제가 조금이라도 존재하는 경우, 정량 값이 크게 effect(영향) 을 받게 되는데, 이는 염료로 사용하는 Coomassie Blue가 acidic하기 때문이다. 염료로는 Coomassie Blue G-250을 사용하며, 이 염료가 단백질과 결합해 생기는 파장의 변화를 측정한다. 그런 다음 정량하고자 하는 단백질이든 Sample을 염료와 같이 섞어 흡광도를 측정(測定) 해 BSA(or BGG)의 값과 비교해보면, BSA는 이미 농도를 알고 있으므로 Sample의 흡광도 결과를 이용해 Sample의 농도를 계산할 수 있게 된다
브래드 퍼드법은 실온에서 사용가능하며, 어느 특별한 장비를 필요로 하지 않는다. 여러 농도의 BSA 또는 BGG(반드시 0농도를 포함해야 한다. 이 때 곡선은 직선형에 가까울수록 신뢰도가 높아진다. 단백질에 따라 Coomassie dye와 결합하는 정도도 조금씩 다를 수 있으므로 주의가 필요하다.
